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        產(chǎn)品展示   ProductsATCC細胞>>轉化細胞>>小鼠胚胎成纖維細胞;MEF
         
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        產(chǎn)品名稱:
        小鼠胚胎成纖維細胞;MEF
        產(chǎn)品型號:
        產(chǎn)品報價:
        產(chǎn)品特點:
        小鼠胚胎成纖維細胞;MEF相關產(chǎn)品:Yellow-Head Baculovirus(YBV)黃頭桿狀病毒探針法熒光定量
        Khasan病毒探針法熒光定量
        St.Louis Encephalitis Virus(SLEV)圣路易斯腦炎病毒探針法熒光定量
          小鼠胚胎成纖維細胞;MEF的詳細資料:

        公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:

        產(chǎn)品名稱

        生長特性

        貨號

        小鼠胚胎成纖維細胞;MEF

        貼壁生長

        EY-X63262

        細胞名稱  小鼠胚胎成纖維細胞;MEF
        形態(tài)特性: 成纖維細胞樣

        生長特性: 貼壁生長

        特征特性: 取孕9天的615小鼠胚胎,去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細胞可用作飼養(yǎng)層細胞,支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態(tài)。當作為飼養(yǎng)層細胞時,MEF需經(jīng)C處理停止生長。建議作為ES細胞的飼養(yǎng)層時,MEF不要超過6代。

        培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%CS

        傳代方法: 1:3傳代;3~4天1次。

        傳代情況: P1

        凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

        支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
        ?
        冷凍保存細胞之方法
        冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
        冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
        實驗要點及說明:
        1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
        2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
        3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
        4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
        5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
        實驗報告:
        一、分離與培養(yǎng):
        1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
        2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
        3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
        4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
        5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
        二、免疫熒光鑒定:
        1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
        2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
        4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
        5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
        6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
        人肺腺癌細胞;SPC-A-1形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Canine (dog) IL-8 ELISA Kit-Cell Lysate

        人癌細胞;MDA-MB-435S形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長犬γ干擾素(Canine IFN-γ)Elisa試劑盒

        人導管癌細胞;ZR-75-30形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Canine (dog) IL-15 ELISA Kit-Cell Lysate

        小鼠肉瘤細胞;CCRFS-180形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 貼壁生長Canine (dog) IL-8 ELISA Kit-Whole Blood

        Hela細胞耐藥亞株;HeLa/DDP形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Human ADAMTS13 Elisa Kit

        血管平滑肌細胞;T/GHA-VSMC形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長Sheep Endostatin ELISA Kit

        大鼠腹水癌細胞;Walker/LLC-WRC256形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Rabbit Endostatin ELISA Kit

        人癌細胞;MCF7形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Feline Endostatin ELISA Kit

        COC1細胞耐藥亞株;COC1/DDP形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 貼壁生長Human sTNF RII ELISA KIT

        豬腎細胞;PK-15形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長大鼠胰島素(insulin)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

        VERO細胞衍生株;SVP形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長人解整合素樣金屬蛋白酶17酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

        人肺癌細胞;A549[A-549]形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Canine (dog) IL-8 ELISA Kit-Urine

        人肝癌細胞;SMMC-7721形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Human ICOS Ligand ELISA KIT

        人結直腸腺癌細胞;SW480[SW480;SW-480]形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長羊白介素21酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

        人胃癌細胞;HS-746T形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Canine (dog) IL-15 ELISA Kit

        人舌鱗癌細胞;Tca-8113[Tca8113]形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Human ADAM15 ELISA KIT
        小鼠胚胎成纖維細胞;MEF小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒BCGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒Bcl-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒Bcl-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒Bcl-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒Bcl-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒Bcl-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒Bcl-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

        小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒BCRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
        操作步驟:
        1、貼壁細胞的消化
        ①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
        ②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
        ③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
        化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
        ④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
        ⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
        2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

         

        產(chǎn)品相關關鍵字: 小鼠胚胎成纖維細胞 MEF
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        021-69985169
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