耗牛免疫球蛋白GELISA檢測試劑盒洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

LX-2, 人肝星形細胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞

C2C12, 小鼠肌原細胞

 細胞名稱

MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞

MDA-MB-231（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞

Raji，人Burkitt's淋巴瘤細胞

Saos-2，人成骨肉瘤細胞

Caco-2，人結直腸腺癌細胞

NCI-N87 [N87]人胃癌細胞

MGC80-3（MGC-803）人胃癌細胞

EC109，人食管癌細胞

HGC-27人胃癌細胞

AGS人胃腺癌細胞

U251人膠質瘤細胞

THP-1人單核白血病細胞

HuH-7人肝癌細胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

A549, 人肺癌細胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐藥細胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

WM35, 人黑色素瘤細胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

WM451, 人黑色素瘤細胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞

C6, 大鼠腦膠質瘤細胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌

Hela, 人宮頸癌細胞系

HNE2, 人鼻咽癌細胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞

HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系

Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞