CRF elisa酶聯免疫試劑盒(間接法)步驟：

(1) 抗原包被：用包被液將PEDV抗原作1∶5稀釋包被反應板，每孔100μl，同時設陰性細胞培養物對照孔，置4℃過夜。
(2) 洗滌：用洗滌液洗滌2次，每次2min，瀝干。
(3) 加入被檢血清：用保溫液將被檢血清作1∶100稀釋，加入反應板相鄰的兩個孔中，每孔100μl。同時作陰、陽性標準血清對照，置37℃孵育1h。
(4) 洗滌3次：方法同上。
(5) 加入酶結合物：用保溫液將酶結合物作1∶4 000稀釋，加入反應孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
(6) 洗滌3次：方法同上。
(7) 加入底物：每孔100μl，置室溫暗盒內顯色20min。
(8) 加入終止液：每孔50μl，靜置5min。
(9) 測定OD值：用檢測儀，于492nm波長，按儀器使用及制定標準要求調節儀器，測定各反應孔的OD值，記錄結果。

試劑使用須知：
（1）請參照相關法規、文獻、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進行安全操作。
（2）通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理。
（3）萬一試劑操作者并非專業技術人員。必須在專業人士的指導監督下進行操作。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應按照相關法律法規正當處理。
（4）購買后，請務必確認標簽上的注意事項；做好預防顛倒，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認標簽上的注意事項，做好必要的安全對策；對沒有標明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進行操作；必須帶好防護用具，小心翼翼進行操作。

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