鹽析法純化免疫球蛋白技術(shù)分析 

(一)　原理 
蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度輪狀病毒Elisa試劑盒是由蛋白質(zhì)周圍親水基團(tuán)與水形成水化膜的程度，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。當(dāng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，中性鹽對(duì)水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時(shí)，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后，由于離子強(qiáng)度發(fā)生改變，蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和，更加導(dǎo)致蛋白溶解度降低，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。 
(二)　鹽析的操作步驟 
輪狀病毒Elisa試劑盒取正常人混合血清加等量生理鹽水，于攪拌下逐滴加入與 
稀釋血清等量的飽和硫酸銨

(三)　主要材料 
1.　試劑: 
(1)　正常人混合血清；滅菌生理鹽水。 
(2)　飽和硫酸銨溶液的配制: 
稱(NH4)2SO4(AR)400～425克，以50～80℃之蒸餾水500ml溶解，攪拌20分鐘，趁熱過濾。冷卻后以濃氨水(15N　NH4OH)調(diào)PH至7.4。配制好的飽和硫酸銨，瓶底應(yīng)有結(jié)晶析出。 
(3)　萘氏試劑配制： 
稱HgI11.5克，KI8克，加蒸餾水至50ml，攪拌溶解后，再加入20％NaOH 50ml。 
(4)　0.02M, PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液(Phosphate Buffered Saline PBS)配制: 
貯存液: 
A液：0.2M Na2HPO4：Na2HPO4·12H2O 71.64克，加蒸餾水至1000ml； 
B液: 0.2M NaH2P4：NaH2P4·2H２O 3.12克，加蒸餾水至1000ml； 
應(yīng)用液：取A液81ml加B液19ml混合，再以生理鹽水作10倍稀釋即成。 
(5)　0.1M, PH7.4磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer PB)配制: 
將上述A液取81ml與B液19ml混合，再以蒸餾水對(duì)倍稀釋即成。 
(6)　20％磺基水楊酸。 
2.　器材: 
輪狀病毒Elisa試劑盒普通冰箱、離心機(jī)、電磁攪拌器，751桮型紫外分光光度計(jì)、扭力天平，粗天平。 
透析袋、尼龍繩、細(xì)竹棒、精密PH試紙(PH5.5～9.0)、眼科鑷子、小剪刀。 
燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。