BIU-87人膀胱癌細胞實驗操作步驟

細胞傳代與擴增
當細胞密度達到80%-90%時，需進行傳代。棄去舊培養基，用預冷的PBS輕柔洗滌2次以去除殘留血清。加入1-2 mL 0.25%含EDTA），37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞回縮變圓后，立即加入含血清的培養基終止消化。吹打制成單細胞懸液，按1:3至1:4比例分裝至新培養瓶，補充適量培養基，輕輕搖晃使細胞分布均勻，放回培養箱繼續培養。

細胞凍存與復蘇
凍存：取對數生長期細胞，消化離心后棄上清，用預冷的凍存液（含90%血清+10%DMSO）重懸，分裝至凍存管（1-1.5 mL/管），標注細胞類型、代次及日期。程序性降溫：4℃ 30分鐘→-20℃ 2小時→-80℃過夜，最后轉入液氮長期保存。
復蘇：從液氮中迅速取出凍存管，37℃水浴震蕩至冰晶融化，酒精消毒后轉移至15 mL離心管，加5 mL培養基離心（1000 rpm, 5分鐘）。棄上清，用新鮮培養基重懸，接種至培養瓶，24小時后更換培養基以去除DMSO殘留。

實驗干預與檢測
根據研究目的，可進行藥物處理、基因轉染或siRNA干擾等操作。例如：
- 藥物處理：將配置好的藥液加入培養基，設置濃度梯度（如0 μM、5 μM、10 μM），每24小時觀察細胞形態并記錄。
- CCK-8檢測：接種細胞至96孔板（3000-5000細胞/孔），干預后每孔加10 μL CCK-8試劑，孵育2小時，用酶標儀測定450 nm吸光度，計算細胞存活率。

?數據整理與注意事項
- 每次實驗需設立3個復孔，數據取均值±標準差。
- 嚴格無菌操作，定期檢測支原體污染。
- 細胞代數控制在10-15代以內，避免遺傳漂變。