測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELSIA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中間較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 

　　組織勻漿液
 

　　(1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
 

　　(2)將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分。
 

　　(3)將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。
 

　　(4) 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
 

　　尿液、唾液等其他液體生物樣本1000×g離心20min，取上清即可檢測。總的來說，因為ELSIA試劑盒只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了保證檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。
 

　　另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。
 

　　加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣(一般不建議使用)。有些指標(biāo)檢測(如間接法ELSIA試劑盒)需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1min。加酶結(jié)合物工作液和底物工作液時可用多道移液器，使加液過程在短時間內(nèi)完成。